HEMATOXILINA DE HARRIS Solución

Reactivo de Diagnóstico de Uso in Vitro

Cat. 2000083200  

Uso previsto:

Hematoxilina de Harris es la solución más utilizada en el ámbito de la histología y la citología. Es el reactivo que pone de manifiesto las estructuras nucleares de la célula, nucleoproteínas o ácidos nucleicos, en muestras de tejido fijado y parafinado, extendidos citológicos y muestras de tejidos congelados.

Principio

La Hematoxilina es un compuesto que por efecto de su oxidación pasa a constituir una sustancia de color morado oscuro denominada “hemateína”. La hemateína es la que le confiere propiedades tintoriales a la solución de Hematoxilina.

La Hematoxilina de Harris Solución cuenta con un agente oxidante y un mordiente en su composición. Su modo de acción es de tipo “regresivo”, sobretiñendo la muestra para luego eliminar el exceso de colorante en pasos de diferenciación rápidos.

La coloración azul del núcleo celular se produce por la unión del complejo catiónico aluminio-hemateína que es atraído a los aniones de fosfato presentes en el ADN de las células. Lo mismo ocurre con los residuos de arginina (aminoácido básico) de las histonas nucleares.

Reactivos y presentación

Hematoxilina de Harris Solución

Botella 1000 mL Cat. 2000083207

Botella 500 mL Cat. 2000083208

Materiales auxiliares no suministrados

Solución Diferenciadora (opcional):

-           Solución de Acido Clorhídrico al 3 % en Alcohol 70 %.

Solución azulante o Bluing (opcional):

-           Agua de Scott o Solución Alcalina débil, ó Solución de 0,5 g de Carbonato de Litio en 1000 mL de Agua desmineralizada o destilada.

Contratinción:

-           Eosina amarillenta 0,5 % Acuosa (Biopack cat. N° 2000937100)

-           Eosina amarillenta 0,5 % Alcohólica (Biopack cat. N° 2000937000)

-           Eosina Amarillenta Alto Contraste (Biopack cat. N° 2000936900)

-           Etanol 96° o Deshidratante 90° (Biopack cat. N° 2000938300)

-           Etanol absoluto 100° o Deshidratante 100° (Biopack cat. N° 2000948300)

-           Xileno o sustituto Bioclear (Biopack cat. N° 2000942700)

-           Bálsamo de Canadá sintético (Biopack cat. N° 2000130300)

-           Cubreobjetos

Preparación del reactivo:

Hematoxilina de Harris Solución es un producto listo para usar.

Una vez abierto el envase no es necesario el filtrado del producto.

Luego de abierto y estando en uso en cubeta de tinción se recomienda filtrar la solución antes de usar.

Preparación de muestras:

1.         Cortes histológicos parafinados o de tejido fresco montados en portaobjetos

2.         El espesor de los cortes histológicos debe ser el adecuado para evitar la superposición celular. Se recomienda entre 3 y 5 micrones.

3.         En el caso de cortes histológicos congelados o extendidos citológicos previamente fijados, proceder desde el “paso 5” del procedimiento:

Procedimiento general:

1)    Desparafinar  los cortes / láminas por inmersión en 2 cambios de Xilol (cod. 2000166200) o Bioclear (cod. 2000942700) de 10 minutos cada uno. 

2)    Hidratar  los cortes con sucesivos pasajes por alcoholes (Alcohol Etílico absoluto cod. 2000165400, Alcohol Etílico 96º cod. 200093750) o Deshidratantes Uso Histológico (Deshidratante 80º cod. 2000938200, Deshidratante 90º cod. 2000938300, Deshidratante 100º cod. 2000948300), con graduación decreciente terminando con un lavado por inmersión en Agua desmineralizada (cod. 2000140110), durante 2 a 3 minutos.

3)    Teñir por inmersión en solución de Hematoxilina de Harris (cod. 2000083200) por 1 a 3 minutos.

4)    Proceder con el virado por  inmersión en Agua corriente, durante al menos 3 a 5 minutos, hasta coloración azul de las muestras

4.1) Se puede realizar un paso con Solución Diferenciadora, realizando un pasaje por inmersión ráopida en la misma

5)    Realizar una lavado por inmersión en Agua desmineralizada (cod. 2000140110), varias inmersiones.

5.1.) Se puede realizar un paso de Virado Opcional, por inmersión en Solución Alcalina Diluida duarnte 2 minutos.                           

6)    Teñir con solución de Eosina Amarillenta (Eosina amarillenta 0,5 % cod. 2000110500, Eosina amarillenta 0,5 % acuosa cod. 2000937100, Eosina amarillenta 0,5 % alcohólica cod. 2000937000, Eosina amarillenta Alto Contraste cod. 2000936900), por inmersión durante 30 a 60 segundos.

7)    Realizar un lavado rápido por inmersión en Agua Destilada (cod. 2000140110).

8)    Deshidratar los cortes con sucesivos pasajes por Alcoholes (Alcohol Etílico absoluto cod. 2000165400, Alcohol Etílico 96º cod. 200093750) o Deshidratantes Uso Histológico (Deshidratante 80º cod. 2000938200, Deshidratante 90º cod. 2000938300, Deshidratante 100º cod. 2000948300), con graduación creciente.

9)    Aclarar los cortes / láminas por inmersión en 2 cambios de Xilol (cod. 2000166200) o Bioclear (cod. 2000942700). Al menos dejar aclarando en reposo durante 2 minutos.

10)   Realizar  el montaje final con cubreobjeto y Bálsamo de Canadá sintético (cod. 2000130300).

Notas técnicas:

1.         El tiempo de tinción  puede variar según las preferencias de intensidad tonal del usuario.

2.         Luego de un uso intensivo del producto, podrian ajustarse los tiempos de acción del colorante o renovar la solución.

3.         Los núcleos de color púrpura o marrón rojizo son indicativos de un virado o azulado  inadecuado.

4.         El resultado de la tinción puede verse influenciado por factores como la fijación y los tiempos de inmersión en sus componentes

5.         El agua corriente del grifo en algunos caso puede ser de tipo ácida por lo tanto inadecuada para su uso en la etapa de virado o azulado;  en reemplazo utilice una solución alcalina diluida.

6.         De ser excesiva la tinción con eosina podría verse afectado su adecuado contraste con la tinción nuclear. Para aumentar la diferenciación de la eosina, extienda el tiempo en los pasos por alcoholes de deshidratación o realice un lavado en alcohol al 70% luego de su aplicación.

Resultados:

Núcleo celular, nucléolo y cromatina:  Violeta azulado

Citoplasma: Rosa pálido o fuerte

Tejido muscular: Rojo, Rosa fuerte o Fucsia

Eritrocitos: Rojo anaranjado

Protocolo de Tinción Hematoxilina - Eosina

Procedimiento de tinción de Hematoxilina y Eosina para cortes histológicos fijados y parafinados.

El espesor de los cortes histológicos estándar deberá ser de entre 3 y 6 micrones para lograr una correcta visualización de células minimizando la superposición.

Técnica de Uso:

1)    Desparafinar  los cortes / láminas por inmersión en 2 cambios de Xilol (cod. 2000166200) o Bioclear (cod. 2000942700) de 15 minutos cada uno. 

2)    Hidratar  los cortes con sucesivos pasajes por alcoholes (Alcohol Etílico absoluto cod. 2000165400, Alcohol Etílico 96º cod. 200093750) o Deshidratantes Uso Histológico (Deshidratante 80º cod. 2000938200, Deshidratante 90º cod. 2000938300, Deshidratante 100º cod. 2000948300), con graduación decreciente terminando con un lavado por inmersión en Agua desmineralizada (cod. 2000140110), durante 2 a 3 minutos.

3)    Teñir por inmersión en solución de Hematoxilina (Hematoxilina de Harris cod. 2000083200, Hematoxilina de Mayer cod. 2000948900, Hematoxilina de Gill (I) cod. 2000937400, Hematoxilina de Gill (II) cod. 2000949100, Hematoxilina de Gill (III) cod. 2000110100) (*1).

4)    Proceder con el virado por  inmersión en Agua corriente, durante al menos 5 minutos(*2).

5)    Realizar una lavado por inmersión en Agua desmineralizada (cod. 2000140110).

6)    Teñir con solución de Eosina Amarillenta (Eosina amarillenta 0,5 % cod. 2000110500, Eosina amarillenta 0,5 % acuosa cod. 2000937100, Eosina amarillenta 0,5 % alcohólica cod. 2000937000, Eosina amarillenta Alto Contraste cod. 2000936900) (*3).

7)    Realizar un lavado rápido por inmersión en Agua Destilada (cod. 2000140110).

8)    Deshidratar los cortes con sucesivos pasajes por Alcoholes (Alcohol Etílico absoluto cod. 2000165400, Alcohol Etílico 96º cod. 200093750) o Deshidratantes Uso Histológico (Deshidratante 80º cod. 2000938200, Deshidratante 90º cod. 2000938300, Deshidratante 100º cod. 2000948300), con graduación creciente.

9)    Aclarar los cortes / láminas por inmersión en 2 cambios de Xilol (cod. 2000166200) o Bioclear (cod. 2000942700). Al menos dejar aclarando en reposo durante 5 minutos.

10)   Realizar  el montaje final con cubreobjeto y Bálsamo de Canadá sintético (cod. 2000130300).

Resultados:

Núcleo celular:  Violeta azulado (*1)

Citoplasma:  Rosa pálido o fuerte (*3)

Tejido muscular:  Rojo, Rosa o Fucsia (*3)

Eritrocitos:  Rojo anaranjado (*3)

Referencias:

(*1)  Para el procedimiento de tinción Hematoxilina - Eosina, existen varias opciones de solución  de Hematoxilina, todas ellas se aplican de manera similar en la técnica, con variantes en los tiempos de tinción.

Tiempos de tinción:

Hematoxilina de Harris (cod. 2000083200):   1 / 2 minutos.

Hematoxilina según Gill (I) (cod. 2000937400):   5 / 10 minutos.

Hematoxilina según Gill (II) (cod. 2000949100):   2 / 5 minutos.

Hematoxilina según Gill (III) (cod. 2000110100):   2 / 5minutos.

Hematoxilina de Mayer (cod.2000948900)::   10 / 15 minutos.

Se recomienda que el usuario realice ensayos de puesta a punto en los tiempos de tinción, para lograr la intensidad deseada. Los tiempos de aplicación recomendados son a modo referencial.

(*2)  El virado puede acelerarse con agua corriente caliente o aplicando soluciones azulantes.

(*3)  Para el procedimiento de tinción Hematoxilina - Eosina, existen varias opciones de solución de Eosina, todas ellas se aplican de manera similar en la técnica, con variantes en los tiempos de tinción.

Tiempos  de tinción:

Eosina Amarillenta 0,5 % (cod. 2000110500):   5 / 10 minutos.

Eosina Amarillenta 0,5 % Acuosa (cod. 2000937100):   3 / 5 minutos.

Eosina Amarillenta 0,5 % Alcohólica (cod. 2000937000):   1 / 3 minutos.

Eosina Amarillenta Alto Contraste (cod. 2000936900):   15 segundos / 1 minuto.

Se recomienda que el usuario realice ensayos de puesta a punto en los tiempos de tinción, para lograr la intensidad deseada.

Tinción según Papanicolau

Protocolo de Tinción según Papanicolaou

Colorantes y reactivos necesarios:

·    Fijador Citológico PATHOFIX (cat. 2000953000)

·    Fijador Citológico SACCOMANNO (cat. 2000948800)

·    HEMATOXILINA de HARRIS (cat. 2000083200)

·    HEMATOXILINA de GILL (I) (cat. 2000937400)

·    HEMATOXILINA de GILL (II) (cat. 2000949100)

·    HEMATOXILINA de GILL (III) (cat. 2000110100)

·    OG Citológico (cat. 2000937200)

·    OG 6 (cat. 2000110200)

·    EA Citológico (cat. 2000937300)

·    EA 36 (cat. 2000110300)

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