Protocolo de Tinción Hematoxilina - Eosina

Procedimiento de tinción de Hematoxilina y Eosina para cortes histológicos fijados y parafinados.

El espesor de los cortes histológicos estándar deberá ser de entre 3 y 6 micrones para lograr una correcta visualización de células minimizando la superposición.

Técnica de Uso:

1)    Desparafinar  los cortes / láminas por inmersión en 2 cambios de Xilol (cod. 2000166200) o Bioclear (cod. 2000942700) de 15 minutos cada uno.  

2)    Hidratar  los cortes con sucesivos pasajes por alcoholes (Alcohol Etílico absoluto cod. 2000165400, Alcohol Etílico 96º cod. 200093750) o Deshidratantes Uso Histológico (Deshidratante 80º cod. 2000938200, Deshidratante 90º cod. 2000938300, Deshidratante 100º cod. 2000948300), con graduación decreciente terminando con un lavado por inmersión en Agua desmineralizada (cod. 2000140110), durante 2 a 3 minutos.

3)    Teñir por inmersión en solución de Hematoxilina (Hematoxilina de Harris cod. 2000083200, Hematoxilina de Mayer cod. 2000948900, Hematoxilina de Gill (I) cod. 2000937400, Hematoxilina de Gill (II) cod. 2000949100, Hematoxilina de Gill (III) cod. 2000110100) ^(*1).

4)    Proceder con el virado por  inmersión en Agua corriente, durante al menos 5 minutos ^(*2).

5)    Realizar una lavado por inmersión en Agua desmineralizada (cod. 2000140110).

6)    Teñir con solución de Eosina Amarillenta (Eosina amarillenta 0,5 % cod. 2000110500, Eosina amarillenta 0,5 % acuosa cod. 2000937100, Eosina amarillenta 0,5 % alcohólica cod. 2000937000, Eosina amarillenta Alto Contraste cod. 2000936900) ^(*3).

7)    Realizar un lavado rápido por inmersión en Agua Destilada (cod. 2000140110).

8)    Deshidratar los cortes con sucesivos pasajes por Alcoholes (Alcohol Etílico absoluto cod. 2000165400, Alcohol Etílico 96º cod. 200093750) o Deshidratantes Uso Histológico (Deshidratante 80º cod. 2000938200, Deshidratante 90º cod. 2000938300, Deshidratante 100º cod. 2000948300), con graduación creciente.

9)    Aclarar los cortes / láminas por inmersión en 2 cambios de Xilol (cod. 2000166200) o Bioclear (cod. 2000942700). Al menos dejar aclarando en reposo durante 5 minutos.

10)   Realizar  el montaje final con cubreobjeto y Bálsamo de Canadá sintético (cod. 2000130300).

Resultados:

Núcleo celular:  Violeta azulado ^(*1)

Citoplasma:  Rosa pálido o fuerte ^(*3)

Tejido muscular:  Rojo, Rosa o Fucsia ^(*3)

Eritrocitos:  Rojo anaranjado ^(*3)

Referencias:

^(*1)  Para el procedimiento de tinción Hematoxilina - Eosina, existen varias opciones de solución  de Hematoxilina, todas ellas se aplican de manera similar en la técnica, con variantes en los tiempos de tinción.

Tiempos de tinción:

Hematoxilina de Harris (cod. 2000083200):   1 / 2 minutos.

Hematoxilina según Gill (I) (cod. 2000937400):   5 / 10 minutos.

Hematoxilina según Gill (II) (cod. 2000949100):   2 / 5 minutos.

Hematoxilina según Gill (III) (cod. 2000110100):   2 / 5minutos.

Hematoxilina de Mayer (cod.2000948900)::   10 / 15 minutos.

Se recomienda que el usuario realice ensayos de puesta a punto en los tiempos de tinción, para lograr la intensidad deseada. Los tiempos de aplicación recomendados son a modo referencial.

^(*2)  El virado puede acelerarse con agua corriente caliente o aplicando soluciones azulantes.

^(*3)  Para el procedimiento de tinción Hematoxilina - Eosina, existen varias opciones de solución de Eosina, todas ellas se aplican de manera similar en la técnica, con variantes en los tiempos de tinción.

Tiempos  de tinción:

Eosina Amarillenta 0,5 % (cod. 2000110500):   5 / 10 minutos.

Eosina Amarillenta 0,5 % Acuosa (cod. 2000937100):   3 / 5 minutos.

Eosina Amarillenta 0,5 % Alcohólica (cod. 2000937000):   1 / 3 minutos.

Eosina Amarillenta Alto Contraste (cod. 2000936900):   15 segundos / 1 minuto.

Se recomienda que el usuario realice ensayos de puesta a punto en los tiempos de tinción, para lograr la intensidad deseada.