Coloración de Ziehl Neelsen Biopack®

Reactivo de Diagnóstico de Uso in Vitro

Finalidades de uso del producto:

En los casos de una sospecha de tuberculosis son necesarios procesos necesarios de cultivo y tinción. Dado que Mycobacterium Tuberculosis y otros organismos resistentes al ácido no se colorean con la tinción de Gram, es necesario emplear uno de los diversos procedimientos para organismos ácidos resistentes. Las micobacterias se tiñen con el método de Ziehl Neelsen. Mycobacterium Tuberculosis es un bacilo ácido alcohol resistente, de extremos redondeados, que se tiñe de forma irregular. Su aspecto a veces es algo incurvado, tiene una longitud de 1 a 4 micrones, y un ancho de 0.3 a 0.6 micrones. Su ácido resistencia demostrable por la tinción de Ziehl Neelsen, se debe ante todo a los componentes lipídicos de su pared celular.

Principio de acción o aplicación del producto:

El examen de las muestras recibidas en el laboratorio microbiológico comprende dos tipos de procedimiento generales: el examen directo de una extensión teñida o sin teñir, y el cultivo en los medios adecuados. Al remitirse muestras para exámenes bacteriológicos, unas preparaciones y tinciones bien realizadas ofrecen una orientación excelente acerca de los medios que inocular y que ulteriores exámenes deben hacerse, siendo este un paso importante para el médico en el tratamiento del paciente. Para los estudios bacteriológicos hay varios métodos de tinción siendo especialmente útiles el método de Gram con algunas de sus modificaciones y, en el caso de una sospecha clínica de infección por Mycobacteria, el método de Ziehl Neelsen. Los productos COLORANTES BACTERIOLÓGICOS DE BIOPACK ® (COLORACÍON DE GRAM [MODIFICACIÓN DE HUCKER] Y COLORACIÓN DE ZIEHL NEELSEN) son colorantes de utilidad en el laboratorio microbiológico clínico. Todas las tinciones usadas en el laboratorio de microbiología clínica pueden ser funcionalmente divididas en 4 categorías: tinción primaria, mordiente, decoloración y tinción secundaria, esta última también llamada coloración de contraste o contratinción. La tinción primaria es generalmente un colorante básico con carga positiva. Los colorantes primarios comunes incluyen carbol fucsina, violeta cristal, azul de metileno y safranina. Estos colorantes primarios van a marca no solamente el microorganismo blanco, sino también muchos microorganismos no blancos y material de fondo. En el laboratorio las tinciones se usan de diferentes formas: para marcación directas de muestras, para que el objeto microscopio sea más claramente visible que el no teñido, y para aumentar la utilidad del microscopio óptico, como constituyente de medio de cultivo donde se usan como indicadores del cambio de pH o por su acción bacteriostática, como indicadores de oxidación reducción para demostrar la presencia o ausencia de condiciones anaerobias. Los colorantes son compuestos orgánicos naturales o artificiales compuestos por tres componentes básicos: un anillo de benceno o aromático, un cromóforo, y grupos auxocrómicos. La mayoría de los colorantes biológicos son derivados del alquitrán y su estructura fundamental es el anillo de benceno. Los grupos atómicos específicos conocidos como cromóforos se asocian con el color. Estos radicales químicos absorben la luz de diferentes longitudes de onda ya que actúan como primos químicos. El anillo de benceno con los radicales cromóforos se considera el cromógeno y es coloreado, pero en sí mismo no es un colorante ya que no puede unirse a los microorganismos o tejidos. Los grupos auxocrómicos proveen las propiedades de combinación del colorante formando uniones salinas electrostáticas con radicales ionizables sobre las proteínas, glicoproteínas y lipoproteínas de componentes de los tejidos o de las membranas de los gérmenes. Este proceso puede ocurrir directamente o a través de la acción quelante del mordiente.

Los colorantes son anfotéricos, es decir, pueden actuar como ácido o como base de acuerdo a si la mayor proporción del colorante es aniónica o catiónica.

Los colorantes básicos marcan estructuras que son ácidas, y los colorantes ácidos reaccionan con sustancias básicas. Un mordiente es un proceso químico o físico que fija el colorante primario al microorganismo blanco. Los mordientes comunes incluyen complejos iodados como se usa en la coloración de Gram, y calor o fenol usados en la marcación rápida ácida.

Un decolorante es una sustancia química que extrae la tinta no unida del microorganismo blanco. Luego del paso de la decoloración, los microorganismos blanco son el color de la tinción primaria, y los organismos no blancos y el fondo deben estar desprovistos de color. Los decolorantes comunes incluyen acetona o alcohol para la coloración de Gram, y una mezcla de ácido y alcohol para la marcación ácida rápida. La mayoría de los sistemas de tinción biológica emplean una marcación secundaria o contramarcación para proveer color a los microorganismos no blanco. En general, la contramarcación se haya dentro de una parte diferente del espectro visible de marcación primaria. Algunas contramarcaciones son aditivas a las marcaciones primarias. Por ejemplo, la contramarcación roja de la tinción Gram es aditiva a la marcación primaria azul para producir un microorganismo blanco de color púrpura. En otros casos la contramarcación no marca en absoluto al microorganismo blanco. Por ejemplo, la contramarcación azul de la marcación ácida rápida no penetra en el microbio blanco (Mycobacteria) para afectar su color rojo. Por lo tanto, el objetivo es rojo y el fondo es azul.

Componentes provistos con el producto:

Ziehl Neelsen Coloración 100 mL:  Decolorante 100 mL, Fucsina Básica 100 mL y Azul de Metileno 100 mL. Repuestos individuales de cada solución.

Ziehl Neelsen Coloración 500 mL:  Decolorante 500 mL, Fucsina Básica 500 mL y Azul de Metileno 500 mL. Repuestos individuales de cada solución.

Ziehl Neelsen Coloración 1000 mL:  Decolorante 1000 mL, Fucsina Básica 1000 mL y Azul de Metileno 1000 mL. Repuestos individuales de cada solución.

Condiciones adecuadas de almacenamiento:

Almacenar a temperatura ambiente entre 15°C y 30°C, protegido de la luz.

Conservar bajo llave en lugar fresco y bien aireado lejos del alcance do los niños, entre 15 y 30°C y protegido de la luz. Mantener el recipiente bien cerrado y alejado de fuentes de ignición.

Orientaciones sobre los cuidados con la muestra biológica:

Para el diagnóstico de los casos clásicos de tuberculosis pulmonar, se requiere la recolección de 3 muestras de esputo sucesivas tomadas a la mañana temprano y mediante una inducción de tos profunda. Se debe tomar en un recipiente estéril de boca ancha con tapa a rosca de cierre ajustado. El paciente debe ser educado para apretar el borde del recipiente contra el labio inferior en el momento de la expectoración para minimizar la posibilidad de contaminación de la parte exterior del recipiente.

El material obtenido por cepillado bronquial y de aspiración por aguja fina debe ser colocado en un vial o tubo estéril conteniendo 10 ml de caldo Middlebrook 7H9 suplementado con seroalbúmina bovina (concentración final de 1 a 2%) y tween 80 (0,5%). Los lavados bronquiales y broncoalveoalares pueden ser enviados directamente al laboratorio en los recipientes en los cuales son recogidos. Las muestras de orina y líquido cefalorraquídeo también pueden ser enviadas en recipientes estériles. Las muestras de líquidos que pueden contener fibrinógeno (pericardio, pleura, peritoneo) requieren la adición de un anticoagulante. Los lavados gástricos deben ser transportados al laboratorio lo antes posible y neutralizado antes de ser procesado.

El laboratorio que recibe la muestra debe anotar al momento de recepción para identificar el tiempo de tránsito de la muestra. Las muestras que han estado demasiado tiempo en tránsito pueden no ser útiles para el análisis microbiológico. Las muestras deben ser transportadas en recipientes adecuados. El personal que toma o transporta la muestra debe estar informado acerca del riesgo que contraer una enfermedad infecciosa que es inherente a esta actividad.

Técnica de Uso:

1-         Preparar el extendido de la manera usual, fijándolo mediante calor.

2-         Cubrir el extendido con Fucsina Básica.

3-         Flamear suavemente hasta el desprendimiento de vapor. Mantener por 5 (cinco) minutos. No permitir que el colorante hierva. No permitir que la solución se evapore.

4-         Repetir el procedimiento una vez más.

5-         Dejar enfriar y lavar con agua corriente.

6-         Decolorar con el Decolorante haciéndola correr por el extendido.

7-         Lavar con agua corriente.

8-         Cubrir el extendido con Azul de Metileno durante 1 (un) minuto.

9-         Lavar con agua corriente.

Limitaciones del proceso de tinción:

La técnica de Ziehl Neelsen es un primer paso orientativo para identificación de Mycobacterias en líquidos biológicos. Le permite al laboratorista tener una primera aproximación al germen causal de una infección lo cual, a su vez, permite al médico iniciar el tratamiento con prontitud a la espera de otros resultados de laboratorio. Luego de la realización de la prueba de Ziehl Neelsen, el cultivo de la muestra proveerá información adicional para la identificación del germen y el antibiograma informará la sensibilidad antibiótica del mismo.

Precauciones, cuidados especiales y riesgos:

Tóxicos si se inhala o ingiere. Inflamable. Evitar contacto con la piel. Si ocurriera la inhalación, ingesta o contacto con la piel en forma accidental, consultar al médico. No fumar durante su uso. Solamente para uso diagnóstico in vitro.

Solamente para uso profesional:

La aplicación de este tipo de reactivos debe ser realizada por personal especializado.

El usuario deberá cumplir las directivas locales sobre seguridad en el trabajo y aseguramiento de la calidad.

Protección contra infecciones:

El usuario debe considerar el uso de equipamiento de protección personal eficaz contra infecciones de acuerdo con las directivas de trabajo en laboratorio.

Indicaciones para la eliminación de residuos

El envase debe ser eliminado de acuerdo con las directivas válidas de eliminación de residuos.

Las soluciones usadas y las soluciones caducas deben eliminarse como desecho peligroso, debiéndose cumplir las directivas locales de eliminación de residuos.

Clasificación de sustancias peligrosas:

Tener en cuenta la clasificación de sustancias peligrosas en la etiqueta del producto y las indicaciones de la ficha de datos de seguridad.

Ficha de seguridad del producto en www.biopack.com.ar

Todos nuestros productos cuentan con su correspondiente ficha técnica y de seguridad, disponibles en forma on line:  https://www.biopack.com.ar/index.html

Indicación al consumidor:

El producto está garantizado por el fabricante hasta su fecha de vencimiento si se lo transporta y almacena en las condiciones prescriptas. Ante cualquier consulta, el fabricante puede ser contactado personalmente, por email o por teléfono o ingresando en    www.biopack.com.ar   ,solapa de contacto.

Referencias Bibliográficas:

1-         American Chemical Society Specification, 8va. Ed., 1993, pág. 103-105,319-321,370-373.

2-         Todd Sandford. Diagnóstico clínico por el laboratorio. I. Davidsom, J.B. Henry. 6ta. Ed., Salvat, pág. 139-162.

3-         Arthur W. Ham. Tratado de Histología, 7ma. Ed., Interamericana, pág. 235-269.

4-         Jay H. Stein, Ed. Medicina Interna. Tomo II. Salvat Editores, 5ta. Reimpresión, Barcelona, 1986, 2064p.

5-         Albert Balows, Ed. Manual of Clinical Microbiology. American Society for Microbiology. 5ta. Ed., Washington, 1991, 1364p.

Establecimiento elaborador:

Sistemas Analíticos S.A.

Ruta N°9 Km. 105,5 Colectora Oeste, Lima, pdo. Zárate, pcia. Buenos Aires, Argentina.

Reactivo de Diagnóstico de Uso in Vitro

Uso profesional exclusivo.