Tinción según Papanicolau

Protocolo de Tinción según Papanicolaou

Colorantes y reactivos necesarios:

·    Fijador Citológico PATHOFIX (cat. 2000953000)

·    Fijador Citológico SACCOMANNO (cat. 2000948800)

·    HEMATOXILINA de HARRIS (cat. 2000083200)

·    HEMATOXILINA de GILL (I) (cat. 2000937400)

·    HEMATOXILINA de GILL (II) (cat. 2000949100) 

·    HEMATOXILINA de GILL (III) (cat. 2000110100) 

·    OG Citológico (cat. 2000937200)

·    OG 6 (cat. 2000110200) 

·    EA Citológico (cat. 2000937300)

·    EA 36 (cat. 2000110300)

·    EA 50 (cat. 2000110700)

·    DESHIDRATANTE 80° (cat. 2000938200)

·    DESHIDRATANTE 90° (cat. 2000938300)

·    DESHIDRATANTE 100° (cat. 2000948300) 

·    BIOCLEAR (cat. 2000942700)

·    BALSAMO  de CANADA SINTETICO (Cat. 2000130300)

·    Alcohol Etílico 96º

·    Alcohol Etílico absoluto

·    Xilol

Descripción:

El método policromático de tinción según Papanicolaou es el más utilizado para el diagnóstico de muestras citológicas cérvico-vaginales, líquidos o fluidos obtenidos por punción, y exudados y secreciones corporales en la medicina humana. 

Principio: 

El método PAP de tinción consta de tres etapas:

1.  Tinción para visualizar los núcleos celulares, con solución de Hematoxilina de Harris o con solución de Hematoxilina de Gill.

2.  Tinción de citoplasmas celulares con solución OG: presenta alta afinidad por células maduras y queratinizadas, con un patrón de tinción de diferentes tonalidades anaranjadas.

3.  Tinción con solución policroma EA: estos colorantes tiñen en forma diferenciada los citoplasmas de células escamosas maduras, inmaduras, células ciliadas y mucina.

Preparación de muestras:

Para lograr una satisfactoria preparación citológica es necesario que la toma o recolección del material sea adecuada. Que el extendido del material no cuente con grandes conglomerados de material (superposición celular). Esto dificulta la fijación, la correcta tinción y la posterior visualización al microscopio.

Fijación:

1.  Citología ginecológica: realizar la fijación de la muestra inmediatamente después de realizado el extendido sumergiendo en Alcohol Etílico 96° o rociando con Fijador Citológico Pathofix. Continuar con procedimiento de tinción.

2.  Citología oncológica y/no ginecológica: Agregar solución de Fijador de Saccomano a igual volumen de muestra, homogenizar y dejar fijar durante 60 minutos. Centrifugar, realizar extendidos citológicos y dejar secar para lograr mayor adhesión de la muestra. Continuar con procedimiento de tinción.

Procedimiento de tinción:                                                                 

1-  Sumergir los extendidos en Alcohol Etílico 96° por 5 minutos.

2-  Lavar en agua destilada, varias inmersiones.

3-  Teñir con solución de Hematoxilina de Harris o solución de Hematoxilina de Gill (I), de 40 segundos a 2 minutos ^(*1).

4-  Virar en agua corriente 5 minutos.

5-  Sumergir los extendidos en Alcohol Etílico 96°, varias inmersiones.

6-  Teñir con solución OG Citológico durante 2 a 3 minutos ^(*2).

7-  Sumergir los extendidos en Alcohol Etílico 96°, varias inmersiones.

8-  Teñir con solución EA Citológico, de 1 a 2 minutos ^(*3).

9-  Sumergir los extendidos en Alcohol Etílico 96° o Deshidratante 80°, varias inmersiones.

10-  Sumergir los extendidos en Alcohol Etílico 96° o Deshidratante 90°, varias inmersiones.

11-  Sumergir los extendidos en Alcohol Etílico absoluto o Deshidratante 100°, varias inmersiones.

12-  Sumergir los extendidos en Xilol o Bioclear (sustituto del Xilol), varias inmersiones y dejar reposar 3 minutos.

13-  Sumergir los extendidos en Xilol o Bioclear (sustituto del Xilol), varias inmersiones y dejar reposar 10 minutos.

14-  Montar con Bálsamo de Canadá Sintético y cubreobjetos. En el caso de montar con Bioclear, se recomienda eliminar el exceso de aclarante, para que el bálsamo se disperse y cubra por completo la muestra al colocar el cubreobjeto.

15-  Observar al microscopio.

^(*1)    Alternativamente se puede utilizar en el proceso de tinción las soluciones de Hematoxilina de Gill (II) y Hematoxilina de Gill (III). El usuario deberá ajustar el procedimiento y tiempos de tinción según su experiencia, para el uso de estas soluciones.

^(*2)   Alternativamente se puede utilizar en el proceso de tinción la solución OG 6 . El usuario deberá ajustar el procedimiento y tiempos de tinción según su experiencia, para el uso de esta solución.

^(*3)   Alternativamente se puede utilizar en el proceso de tinción la solución EA 36 y EA 50. El usuario deberá ajustar el procedimiento y tiempos de tinción según su experiencia, para el uso de estas soluciones.

Resultados:

Núcleos:   Azul

Células superficiales:   Rosa

Células Acidófilas:   Rojo         

Células Intermedias y parabasales:   Azul

Células basófilas:   Azul          

Eosinófilos:   Naranja-Rojo

Eritrocitos:   Rojo-Naranja       

Cándidas:   Rojo

Queratina:   Naranja-Rojo        

Trichomonas:   Verde-Azul

Recomendaciones:

El tiempo de tinción de la Hematoxilina de Harris o de la Hematoxilina de Gill debe ser riguroso y periódicamente revisado, para no provocar fenómenos de hipercromasia.

Los colorantes OG y EA actúan por saturación. Los tiempos de tinción del presente protocolo son estimativos pudiendo ser modificados y puestos a punto por cada usuario según los hábitos y modalidades de trabajo.