Análisis | Especificación |
Aspecto | Líquido color rojo oscuro |
Densidad (20°C) | 1,040-1,060 |
pH a 25°C | 2,0-3,0 |
Identificación Espectrofotométrica A | |
λ máx. | 545-565 nm |
Identificación Espectrofotométrica B | |
Relación abs. (p-15)/ abs. (p+15) | 0,90-1,10 |
Hematoxilina según
Gill I Solución Biopack
Hematoxilina según
Gill II Solución Biopack
Hematoxilina según
Gill III (Modificada) Solución
Biopack
Hematoxilina
según Gill I Biopack cat. N°2000937400
Hematoxilina
según Gill II Biopack cat. N° 2000949100
Hematoxilina
según Gill III Biopack cat. N° 2000110100
Uso previsto
Hematoxilina
de Gill es una solución de uso para microscopía. Es un reactivo de uso
para diagnostico celular de
preparaciones histológicas y citológicas, poniendo de manifiesto las
estructuras nucleares de la célula,
nucleoproteínas o ácidos nucleicos en muestras de tejido fijado y
parafinado, extendidos citológicos y muestras de tejidos congelados.
Existen
3 formulaciones relacionadas de Hematoxilina de Gill. La formulación Gill (I)
No. 1 se utiliza como tinción citológica progresiva. Las formulaciones Gill
(II) No. 2 y (III) No. 3 pueden usarse
como tinciones progresivas o regresivas dependiendo del tiempo de tinción.
Principio
La
Hematoxilina es un compuesto que por efecto de su oxidación pasa a constituir
una sustancia de color morado oscuro denominada
“hemateína”. La hemateína le confiere propiedades tintoriales a la
solución de Hematoxilina.
Estas
soluciones de Hematoxilina cuentan con un agente oxidante, un mordiente y un
estabilizador en su composición.
Método
de tinción progresivo con hematoxilina: consiste en obtener una coloración
adecuada controlando el tiempo de aplicación del colorante, de modo que a más
tiempo más coloración. Es decir se tiñe hasta el punto optimo de tinción, luego
se realiza el azulado o virado en agua corriente del grifo. Dicha metodología se aplica para la tinción
con Hematoxilina según Gill (I)
Método
de tinción regresivo con hematoxilina: en el método regresivo se sobre tiñe con
hematoxilina, y el exceso de colorante se elimina en pasos de diferenciación
rápidos. También aquí se realiza el azulado o virado con agua corriente del
grifo. En la tinción regresiva las estructuras del núcleo se presentan más
diferenciadas. Ésta metodología se aplica para la tinción con Hematoxilina
según Gill II y III.
La
coloración azul-violeta del núcleo celular se produce por la unión del complejo
catiónico aluminio-hemateína que es atraído a los aniones de fosfato presentes
en el ADN de las células. Lo mismo
ocurre con los residuos de arginína (aminoácido básico) de las histonas
nucleares.
Procedencia de
muestras
Se
recomienda que la recolección de muestras se realice de acuerdo con las guías y
estándares locales de procedimientos de laboratorios.
Todos
los derivados sanguíneos o de muestras de tejidos deben considerarse
potencialmente infecciosos.
Los
manuales de procedimientos de histología estándar proporcionan todos los
detalles necesarios para la recolección de muestras y el almacenaje de las
mismas.
Reactivos y
presentación
Hematoxilina
de Gill (I) Solución
Botella
500 mL Cat. 2000937407
Botella
1000 mL Cat. 2000937408
Hematoxilina
de Gill (II) Solución
Botella
500 mL Cat. 2000949107
Botella
1000 mL Cat. 2000949108
Hematoxilina
de Gill (III) Solución
Botella
500 mL Cat. 2000110107
Botella
1000 mL Cat. 2000110108
Materiales auxiliares
no suministrados
Solución
Diferenciadora (opcional)
Acido
Clorhídrico al 3% en Alcohol Etílico 70 %
Solución
azulante o Bluing (Agua de Scott o Solución Alcalina débil, opcionales)
Carbonato
de Litio 0,5 g en 1000 mL de Agua purificada.
Contra
tinción:
Eosina
amarillenta 0,5 % Solución Acuosa (Cat. 2000937100)
Eosina
amarillenta 0,5 % Solución Alcohólica (Cat. 2000937000)
Eosina
Amarillenta Alto Contraste Solución (Cat. 2000936900)
OG
6 según Papanicolaou Solución (Cat. 2000110200)
EA
36 según Papanicolaou Solución (Cat.
2000110300)
EA
50 según Papanicolaou Solución (Cat. 2000110700)
Etanol
96° o Deshidratante 90° (Cat. 2000938300)
Etanol
100° o Deshidratante 100° (Cat. 2000948300)
Xileno
o sustituto Bioclear (Cat. 2000942700)
Bálsamo
de Canadá sintético (Cat. 2000130300)
Preparacion del
reactivo
La
Hematoxilina según Gill (I, II , III)
son soluciones lista para usar.
No
es necesaria la dilución, ni la adición de componentes para su aplicación.
Cualquier
agregado a su composición original puede alterar su función y/o estabilidad.
Preparación de
muestras
1. Cortes histológicos parafinados o de
tejido fresco montados en portaobjetos
2. El espesor de los cortes histológicos
debe ser el adecuado para evitar la superposición celular. Se recomienda entre
3 y 5 micrones.
3. En el caso de cortes histológicos congelados
o extendidos citológicos previamente fijados, proceder desde el “paso 5” del
procedimiento:
Diagnostico
El
diagnostico de muestras debe ser realizados solamente por el profesional
habilitado o personal autorizado.
Deberán
realizarse ensayos previos a la aplicación del producto.
Cada
aplicación deberá incluir muestras de control para descartar resultados
erróneos.
El
microscopio usado deberá corresponder a los requisitos de un laboratorio de
diagnóstico médico.
Procedimiento para
cortes histológicos parafinados: (Método regresivo)
En
el caso de cortes histológicos en fresco (por congelación), proceder desde el
“paso 5”.
Paso Método/Reactivo Técnica Tiempo Observaciones
1 Desparafinar con Xileno / Bioclear 2 cambios 10 minutos
2 Hidratar con Etanol 100º /
Deshidratante 100º Varias inmersiones Pasaje
3 Hidratar con Etanol 96º /
Deshidratante 90º Varias inmersiones Pasaje
4 Hidratar con Etanol 96 /
Desdratante 90 Varias inmersiones Pasaje
5 Agua purificada Inmersión 3
minutos
6 Hematoxilina según Gill II
y III Inmersión 1,5
a 3 minutos
7 Virar en agua corriente Inmersión 3 a 5 minutos Hasta coloración azul de
las muestras
8 Solución Diferenciadora Inmersión rápida Pasaje (10 /
20 segundos) Opcional
9 Lavar en agua corriente / Agua de
Scott o Solución Alcalina débil Inmersión Pasaje / 1 minuto
10 Eosina Solución Inmersión 30
a 60 segundos
11 Lavar en agua corriente Inmersión Pasaje
12 Deshidratar con Alcoholes /
Deshidratantes crecientes Varias inmersiones Pasaje
13 Aclarar con Xileno / Bioclear 2
cambios 2 minutos
14 Montar con Bálsamo de Canadá
Sintético y cubreobjetos. En el caso de
aclarar con Bioclear, se recomienda eliminar el exceso de aclarante, para que
el bálsamo se disperse y cubra por completo la muestra al colocar el
cubreobjeto.
15 Observar al microscopio.
Notas técnicas:
1. El tiempo de tinción puede variar según las preferencias de
tonalidad del usuario.
2. Luego de un uso intensivo del producto,
deben ajustarse los tiempos de acción del colorante o renovar la solución.
3. Los núcleos de color púrpura o marrón
rojizo son indicativos de un virado o azulado
inadecuado.
4. El agua corriente del grifo puede ser
ácida por lo tanto inadecuada para su uso en la etapa de virado o azulado; en reemplazo utilice Agua de Scott o Solución
Alcalina débil.
5. De ser excesiva la tinción con eosina
podría verse afectado un adecuado contraste con la tinción nuclear. Para aumentar
la diferenciación de la eosina, extienda el tiempo en los pasos por alcoholes
de deshidratación o realice un lavado en alcohol al 70% luego de su aplicación.
Resultados
Núcleo
celular, nucléolo y cromatina: Violeta azulado
Citoplasma:
Rosa pálido o fuerte
Tejido
muscular: Rojo,
Rosa fuerte o Fucsia
Eritrocitos:
Rojo
anaranjado
Procedimiento para
cortes extendidos citológicos, método de PAP: (Método progresivo)
Portaobjetos
con extendido / frotis / impronta fijados
Paso Método/Reactivo Técnica Tiempo Observaciones
1 Alcohol 96°/ Deshidratante 90º Inmersió