Histokit® RETICULINA – GOMORI

 

Reactivo de Diagnostico de Uso in Vitro                                                         

2000940903

40 determinaciones

 

Uso previsto:

Histokit®  RETICULINA - GOMORI se emplea como herramienta para diagnóstico de exámenes histológicos en medicina humana, veterinaria o investigación.

Se aplica para visualización al microscopio óptico de Fibras de Reticulina presentes en los tejidos. Estas fibras forman parte de la matriz intercelular tisular.

Se realiza su aplicación sobre cortes de tejidos fijados y embebidos en parafina.

 

Principio:

El método de Reticulina - Gomori produce una impregnación argéntica selectiva, basada en tres etapas:

1)         Impregnación preliminar con una sal de hierro:

Luego de una oxidación previa con Permanganato de Potasio los cortes histológicos son tratados con Hierro (III) Amonio Sulfato. Los iones de hierro se unen a grupos afines en las estructuras argirófilas.

2)         Tratamiento con solución de Plata Amoniacal:

 La solución amoniacal contiene plata en forma de complejo hidrosoluble oxidado. Este catión de plata reemplazará al hierro previamente unido.

3)         Reducción:

Los aldehídos fórmicos actúan como agentes reductores: eliminan el oxígeno del complejo Plata Amoniacal, pasando así a plata metálica que se deposita en las estructuras argirófilas.

 

Reactivos y presentación:

Kit para la realización de 40 determinaciones (de acuerdo al Procedimiento de uso, en base a 8 preparaciones de Solución de Plata Amoniacal con rendimiento sugerido de 5 determinaciones cada una). Éste valor podría variar dependiendo de la modalidad de trabajo aplicada y las variaciones de volumen o gotas utilizados en cada paso, tamaño de las muestras, de los recipientes, etc. 

Contiene:

Reactivos y presentación y elementos auxiliares provistos en el kit:

Solución A: Potasio Permanganato (1 frasco gotero x 40 mL)

Solución B: Sodio Metabisulfito (1 frasco gotero x 40 mL)

Solución C:Hierro (III) Amonio Sulfato (1 frasco gotero x 40 mL)

Solución D: Potasio Hidróxido (1 frasco gotero x 20 mL)

Solución E: Plata Nitrato (1 frasco x 40 mL)

Solución F: Formol (1 frasco gotero x 40 mL)

Solución G: Amonio Hidróxido (1 frasco gotero x 20 mL)

Tubo cónico graduado x 50 ml (1unidad)

Pipeta de transferencia Pasteur graduada de 3,0 mL (3 unidades)

 

Nota: el tamaño de los frascos provistos en el kit puede no ser representativo del volumen de su contenido, pero facilitara la manipulación por parte del operador

 

Materiales requeridos no suministrados:

•           Papel de filtro.

•           Etanol 96º (cat. 2000937500) o Deshidratante 90° (cat. 2000938300)

•           Etanol absoluto 100° (cat. 2000165400) o Deshidratante 100° (cat. 2000948300)

•           Xileno (cat. 2000166200) o sustituto Bioclear (cat. 2000942700)

•           Bálsamo de Canadá sintético (cat. 2000130300)

•           Histokit® Oro - Virofijación (cat. 2000932803). Ver Punto 9 en “Procedimiento de Uso - Consideraciones previas a la realización del procedimiento”.

 

Preparación de los reactivos:

Todas las soluciones del presentes kit se encuentran en concentraciones listas para usar. No es necesaria la dilución, ni la adición de componentes para su aplicación. Cualquier agregado a su composición original puede alterar su función y/o estabilidad.

 

Para realizar las determinaciones, se debe preparar previamente:

 

Preparación de SOLUCION de PLATA AMONIACAL:

En el Tubo Cónico colocar y mezclar

Solución D (Potasio Hidróxido) …….…1,2 mL (equivalente a 25 gotas)

Solución E (Plata Nitrato)…………….. 5 mL

Una vez formado el precipitado resultante de la mezcla, agregar gota a gota (agitando periódicamente) Solución G (Amonio Hidróxido), hasta disolución del precipitado dejando un mínimo del mismo (se utilizan aproximadamente 10 a 15 gotas).

Duplicar el volumen final con Agua purificada o destilada. Filtrar antes de usar.

Volumen final de 15 mL aproximadamente. Rendimiento aproximado 5 determinaciones por preparación.

 

IMPORTANTE:

1)         Una vez preparada la solución de Plata Amoniacal, cubra el tubo cónico con papel de aluminio o cualquier envoltorio negro para evitar el contacto directo con la luz.

2)         Puede preservar ésta solución en heladera a entre 2°C a 8°C durante 7 días. Luego descarte.

3)         Identifique y rotule correctamente el tubo cónico con la solución preparada, refiriendo fecha de elaboración y fecha de descarte propuesta.

4)        No Utilice una misma pipeta para tomar volumen de solución de Frasco D y Frasco E.

4)         El tubo cónico podrá ser reutilizado luego de lavarlo con cepillo de tubo e Hipoclorito de Sodio en dilución, enjuagar con abundante agua corriente, enjuague final con agua purificada y dejar secar por completo.

 

Procedimiento de Uso:

Consideraciones previas a la realización del procedimiento:

1.         Realice el procedimiento de tinción a muestras recientemente cortadas y montadas sobre portaobjetos limpios y secos.

2.         Los cortes / secciones histológicas deben tener un espesor de 4 a 6 micrones.

3.         Evitar la contaminación de los cortes/secciones. No dejar las preparaciones expuestas al aire.

4.         Adherir y desparafinar los cortes histológicos en estufa durante 24 horas a 60ºC.

5.         Siempre manipule las muestras/secciones con guantes.

6.         Use siempre agua purificada o destilada de excelente calidad.

7.         Use materiales de vidrio y herramientas de trabajo bien limpios.

8.         No toque nunca las soluciones de Histokit® con objetos metálicos (pinzas, etc.)

9.         Para una óptima diferenciación y contraste de tinción se recomienda previo a la contratinción realizar virado con Cloruro de Oro y remover el excedente de metales débilmente unidos al tejido con Tiosulfato de Sodio, aplicando Histokit® Oro – Virofijación (cat. 200932803, reactivo no provisto). Ver Nota (2*)

10.           Incorpore un caso “control positivo” para una correcta validación del procedimiento.

 

Procedimiento:

-           Previamente desparafinar los preparados / secciones con Xileno / Bioclear® e hidratar con alcoholes o deshidratantes descendentes en graduación hasta el agua purificada.

Paso    Reactivo / Aplicación                            Temperatura     Tiempo             Observaciones

1          Agua purificada / Lavado                      ambiente          n/a                   n/a

2          Solución A (Potasio Permanganato) /

Cubrir la muestra (1 mL)                        ambiente          10 minutos       Tonalidad violácea del corte/sección

3          Agua purificada / Lavado                      ambiente          n/a                   n/a

4          Solución B (Sodio Metabisulfito) /

Cubrir la muestra (1 mL)                        ambiente          1 minuto           Blanqueo del corte/sección

5          Agua purificada / Lavado                      ambiente          n/a                   n/a

6          Solución C (Hierro (III) Amonio Sulfato/

Cubrir la muestra (1 mL)                        ambiente          10 minutos       n/a

7          Agua purificada / Lavado                      ambiente          n/a                   n/a

8          Solución de Plata Amoniacal (Filtrada)/

Cubrir la muestra (1 mL)                        ambiente          2-4 minutos      Impregnación

9          Agua purificada / Lavado                      ambiente          n/a                   n/a

10        Solución F (Formol) / Cubrir la muestra

(1 mL)                                                  ambiente          3-10 segundos  Reducción

11        Agua purificada / Lavado                      ambiente          n/a                   n/a

12        HistoKit Oro-Virofijación –Solución A /

Cubrir la muestra                                  ambiente          1 minuto           Opcional (*2)

13        Agua purificada / Lavado                      ambiente          n/a                   Opcional (*2)

14        HistoKit Oro-Virofijación- Solución B /

Cubrir la muestra                                  ambiente          2 minutos         Opcional (*2)

15        Agua purificada / Lavado (*1)                ambiente          n/a                   Opcional (*2)

16        Deshidratar, aclarar y montar con

Bálsamo                       ambiente          n/a                   n/a

Nota: 1 mL = 20 gotas

n/a: No aplica

 

Notas técnicas:

(*1)  En el Paso 14, es posible realizar tinción de contraste con Eosina amarillenta 0,5%. Depende del tipo de tejido a tratar y las preferencias del profesional. 

(*2)  Pasos 12 a 15: Procedimiento de Virofijación con Oro opcional (ver Punto 9. en “Consideraciones previas a la realización del procedimiento”). Reactivo no provisto.

 

Resultados previstos:

Fibras colágenas: colores en gama del Marrón.

Fibras de reticulina: color Marrón o Negro.

 

Procedencia de muestras

Se recomienda que la recolección de muestras se realice de acuerdo con las guías y estándares locales de procedimientos de laboratorios.

Todos los derivados sanguíneos o de muestras de tejidos deben considerarse potencialmente infecciosos.

Los manuales de procedimientos histológicos y citológicos estándar proporcionan todos los detalles necesarios para la recolección, manipulación y almacenaje de las mismas.

 

Diagnóstico: 

El microscopio usado debería corresponder a los requisitos de un laboratorio de diagnóstico médico.

Los diagnósticos y evaluaciones las deben realizar solo personas autorizadas y calificadas. Siempre es recomendable el uso de controles de tinción apropiados para descartar resultados erróneos.

 

Estabilidad y Almacenamiento:

Almacenar las soluciones pertenecientes a Histokit® Reticulina Gomori a temperatura ambiente entre 15°C y 30°C, protegido de la luz, en sus envases y caja originales. Una vez abierto, puede conservarse en heladera entre 2°C y 8°C.

Verifique la fecha de vencim