Hematoxilina según Gill I        Solución Biopack

Hematoxilina según Gill II       Solución Biopack

Hematoxilina según Gill III (Modificada)         Solución Biopack

Hematoxilina según Gill I   Biopack cat. N°2000937400

Hematoxilina según Gill II  Biopack cat. N° 2000949100

Hematoxilina según Gill III Biopack cat. N° 2000110100

Uso previsto

Hematoxilina de Gill es una solución de uso para microscopía. Es un reactivo de uso para  diagnostico celular de preparaciones histológicas y citológicas, poniendo de manifiesto las estructuras nucleares de la célula,  nucleoproteínas o ácidos nucleicos en muestras de tejido fijado y parafinado, extendidos citológicos y muestras de tejidos congelados.

Existen 3 formulaciones relacionadas de Hematoxilina de Gill. La formulación Gill (I) No. 1 se utiliza como tinción citológica progresiva. Las formulaciones Gill (II) No. 2 y (III)  No. 3 pueden usarse como tinciones progresivas o regresivas dependiendo del tiempo de tinción.

Principio

La Hematoxilina es un compuesto que por efecto de su oxidación pasa a constituir una sustancia de color morado oscuro denominada  “hemateína”. La hemateína le confiere propiedades tintoriales a la solución de Hematoxilina.

Estas soluciones de Hematoxilina cuentan con un agente oxidante, un mordiente y un estabilizador en su composición.

Método de tinción progresivo con hematoxilina: consiste en obtener una coloración adecuada controlando el tiempo de aplicación del colorante, de modo que a más tiempo más coloración. Es decir se tiñe hasta el punto optimo de tinción, luego se realiza el azulado o virado en agua corriente del grifo.  Dicha metodología se aplica para la tinción con Hematoxilina según Gill (I)

Método de tinción regresivo con hematoxilina: en el método regresivo se sobre tiñe con hematoxilina, y el exceso de colorante se elimina en pasos de diferenciación rápidos. También aquí se realiza el azulado o virado con agua corriente del grifo. En la tinción regresiva las estructuras del núcleo se presentan más diferenciadas. Ésta metodología se aplica para la tinción con Hematoxilina según Gill II y III.

La coloración azul-violeta del núcleo celular se produce por la unión del complejo catiónico aluminio-hemateína que es atraído a los aniones de fosfato presentes en el  ADN de las células. Lo mismo ocurre con los residuos de arginína (aminoácido básico) de las histonas nucleares.

Procedencia de muestras

Se recomienda que la recolección de muestras se realice de acuerdo con las guías y estándares locales de procedimientos de laboratorios.

Todos los derivados sanguíneos o de muestras de tejidos deben considerarse potencialmente infecciosos.

Los manuales de procedimientos de histología estándar proporcionan todos los detalles necesarios para la recolección de muestras y el almacenaje de las mismas.

Reactivos y presentación

Hematoxilina de Gill (I) Solución

Botella 500 mL Cat. 2000937407

Botella 1000 mL Cat. 2000937408

Hematoxilina de Gill (II) Solución

Botella 500 mL Cat. 2000949107

Botella 1000 mL Cat. 2000949108

Hematoxilina de Gill (III) Solución

Botella 500 mL Cat. 2000110107

Botella 1000 mL Cat. 2000110108

Materiales auxiliares no suministrados

Solución Diferenciadora (opcional)

Acido Clorhídrico al 3% en Alcohol Etílico 70 %

Solución azulante o Bluing (Agua de Scott o Solución Alcalina débil, opcionales)

Carbonato de Litio 0,5 g en 1000 mL de Agua purificada.

Contra tinción:

Eosina amarillenta 0,5 % Solución Acuosa (Cat. 2000937100)

Eosina amarillenta 0,5 % Solución Alcohólica (Cat. 2000937000)

Eosina Amarillenta Alto Contraste Solución (Cat. 2000936900)

OG 6 según Papanicolaou Solución (Cat. 2000110200)

EA 36  según Papanicolaou Solución (Cat. 2000110300)

EA 50 según Papanicolaou Solución (Cat. 2000110700)

Etanol 96° o Deshidratante 90° (Cat. 2000938300)

Etanol 100° o Deshidratante 100° (Cat. 2000948300)

Xileno o sustituto Bioclear (Cat. 2000942700)

Bálsamo de Canadá sintético (Cat. 2000130300)

Preparacion del reactivo

La Hematoxilina según Gill (I, II , III)  son  soluciones lista para usar.

No es necesaria la dilución, ni la adición de componentes para su aplicación.

Cualquier agregado a su composición original puede alterar su función y/o estabilidad.

Preparación de muestras

1.         Cortes histológicos parafinados o de tejido fresco montados en portaobjetos

2.         El espesor de los cortes histológicos debe ser el adecuado para evitar la superposición celular. Se recomienda entre 3 y 5 micrones.

3.         En el caso de cortes histológicos congelados o extendidos citológicos previamente fijados, proceder desde el “paso 5” del procedimiento:

Diagnostico

El diagnostico de muestras debe ser realizados solamente por el profesional habilitado o personal autorizado.

Deberán realizarse ensayos previos a la aplicación del producto.

Cada aplicación deberá incluir muestras de control para descartar resultados erróneos.

El microscopio usado deberá corresponder a los requisitos de un laboratorio de diagnóstico médico.

Procedimiento para cortes histológicos parafinados: (Método regresivo)

En el caso de cortes histológicos en fresco (por congelación), proceder desde el “paso 5”. 

Paso     Método/Reactivo                 Técnica   Tiempo Observaciones

1          Desparafinar con  Xileno / Bioclear        2 cambios       10 minutos      

2          Hidratar con Etanol 100º / 

Deshidratante 100º                                Varias inmersiones Pasaje 

3          Hidratar con Etanol 96º / 

Deshidratante 90º                                  Varias inmersiones Pasaje 

4          Hidratar con Etanol 96 /  

Desdratante 90                                   Varias inmersiones Pasaje 

5          Agua purificada                                       Inmersión             3 minutos        

6          Hematoxilina según Gill  II  y  III          Inmersión            1,5 a 3 minutos

7          Virar  en agua corriente                           Inmersión  3 a 5 minutos Hasta coloración azul de

las muestras

8          Solución Diferenciadora                        Inmersión rápida  Pasaje (10 / 

20 segundos)         Opcional

9          Lavar en agua corriente / Agua de 

Scott o Solución Alcalina débil           Inmersión       Pasaje / 1 minuto         

10        Eosina Solución                                    Inmersión     30 a 60 segundos        

11        Lavar en agua corriente                         Inmersión      Pasaje 

12        Deshidratar con Alcoholes / 

Deshidratantes crecientes Varias inmersiones Pasaje 

13        Aclarar con Xileno / Bioclear                  2 cambios   2 minutos        

14        Montar con Bálsamo de Canadá Sintético  y cubreobjetos. En el caso de aclarar con Bioclear, se recomienda eliminar el exceso de aclarante, para que el bálsamo se disperse y cubra por completo la muestra al colocar el cubreobjeto.

15        Observar al microscopio.

Notas técnicas:

1.         El tiempo de tinción  puede variar según las preferencias de tonalidad del usuario.

2.         Luego de un uso intensivo del producto, deben ajustarse los tiempos de acción del colorante o renovar la solución.

3.         Los núcleos de color púrpura o marrón rojizo son indicativos de un virado o azulado  inadecuado.

4.         El agua corriente del grifo puede ser ácida por lo tanto inadecuada para su uso en la etapa de virado o azulado;  en reemplazo utilice Agua de Scott o Solución Alcalina débil.

5.         De ser excesiva la tinción con eosina podría verse afectado un adecuado contraste con la tinción nuclear. Para aumentar la diferenciación de la eosina, extienda el tiempo en los pasos por alcoholes de deshidratación o realice un lavado en alcohol al 70% luego de su aplicación.

Resultados

Núcleo celular, nucléolo y cromatina:              Violeta azulado

Citoplasma:                                                      Rosa pálido o fuerte

Tejido muscular:                                               Rojo, Rosa fuerte o Fucsia

Eritrocitos:                         Rojo anaranjado

Procedimiento para cortes extendidos citológicos, método de PAP: (Método progresivo)

Portaobjetos con extendido / frotis / impronta fijados

Paso     Método/Reactivo          Técnica       Tiempo    Observaciones

1          Alcohol 96°/ Deshidratante 90º    Inmersión    10 minutos    Fijación / Disolución

de fijadores a base de

lacas

2          Lavar en agua purificada                        Varias inmersiones,

hasta hidratación 2 minutos        

3          Teñir con Hematoxilina de Gill I/II            Inmersión  1,5 / 3 minutos  (*1)

4          Virar en agua corriente / Agua de 

Scott o Solución Alcal