-
Desparafinar los cortes / láminas por inmersión en 2 cambios de Xileno p.a. o Bioclear, de 15 minutos cada uno.
-
Hidratar los cortes con sucesivos pasajes por
alcoholes (Alcohol
Etílico absoluto y Alcohol Etílico 96º) o deshidratantes
histológicos (Deshidratante 100º / 90º / 80º), con graduación
decreciente terminando con un lavado por inmersión en
Agua Desmineralizada, durante
2 a 3 minutos.
-
Incubar
durante 1 hora en estufa a 60ºC con Fijador
de Bouin o en microondas durante 1
minuto a potencia máxima, y dejar
enfriar durante 15 minutos.
-
Lavar
en agua corriente hasta quitar por completo la tinción amarilla residual de
la solución de Bouin. Luego lavar con
abundante Agua desmineralizada.
-
Teñir
con Solución de Trabajo de
Hematoxilina Férrica de Weigert durante 10 minutos (*1).
-
Lavar
en agua corriente durante 10 minutos.
-
Teñir
con Solución de Biebrich
Escarlata /
Fucsina Acida o Solución
de Ponceau de Xilidina / Fucsina Acida durante 3 minutos (*2).
-
Lavar
con Agua desmineralizada.
-
Tratar
con Solución de Acido Fosfomolíbdico 2 % o Solución
de Acido Fosfotúngstico 2 %, durante 5 minutos (*3).
-
Lavar
con Agua desmineralizada.
-
Teñir
con Solución de Azul de
Anilina o Solución
de Fast Green FCF,
durante 2 minutos (*4).
-
Lavar
con Agua desmineralizada.
-
Lavar en Solución
de Acido Acético al 1 %
en Agua desmineralizada (10 a 15 segundos).
-
Deshidratar
con sucesivos
pasajes por alcoholes (Alcohol Etílico 96º y Alcohol Etílico absoluto) o
deshidratantes
histolçogicos (Deshidratante 80º / 90º / 100º), con graduación
creciente.
-
Aclarar con Xileno p.a. o Bioclear.
-
Montar con Bálsamo Sintetico y
cubreobjeto.
Notas:
(*1) - La
Solución de Trabajo de Hematoxilina Férrica de Weigert se debe descartar después de
usar.
(*2) - La
aplicación y elección tanto de la Solución
de Biebrich Escarlata / Fucsina Acida como de la Solución de Ponceau de Xilidina / Fucsina
Acida, son a criterio del usuario. Ambas soluciones aplican para la tinción de
las mismas estructuras tisulares con diferencia en las tonalidades finales de
tinción.
(*3) - Las
soluciones de Acido Fosfomolíbdico 2 % y de
Acido Fosfotúngstico 2 % pueden ser utilizadas como soluciones mordientes de
tinción.
(*4) - La
aplicación y elección tanto de la Solución
de Azul de Anilina como de la
Solución de Fast Green FCF, son a criterio
del usuario. Ambas soluciones tiñen las mismas estructuras tisulares con
diferencia en las tonalidades finales de tinción.
Resultados con Escarlata de Biebrich / Fucsina
Acida:
Núcleos………………………………………………………………… Azul Oscuro /
Negro
Citoplasma,
queratina, fibras musculares y eritrocitos……………
Rojo
Colágeno y
reticulina…………………………………………………. Azul o
Verde
Resultados con Ponceau de Xilidina/ Fucsina
Acida:
Núcleos………………………………………………………………….
Azul Oscuro/ Negro
Citoplasma,
queratina y eritrocitos………………………………..… Gama
de rojos
Fibras
musculares…………………………………………………….. Rojo vivo
/ Fucsia
Colágeno y
reticulina………………………………………………….. Azul o
Verde
Referencias
Bibliograficas:
“Laboratorio de Anatomía Patológica”, autor: Raimundo García del Moral
.
“Theory
and Practice of Histological Techniques “ 7th Edition, autor: John D. Bancroft
.
“Laboratory methods
in histotechnology”, Armed Forces Institute of Pathology
(U.S.)
"Theory and Practice of Histological Techniques", autores S. Kim
Suvama, Christopher Layton & John D.
Bancroft)
USOS ANALITICOS
Método de Tinción selectiva para las fibras colágenas en dos etapas.
BIBLIOGRAFIA
Laboratorio de Anatomía Patológica, Raimundo García del Moral, 1a Ed. Pág 177
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